AQP^TM-SNP/InDel分型通用试剂盒

1. AQP^TM-SNP/InDel分型通用试剂盒简介

AQP^TM基因分型系统又称等位基因特异的定量PCR基因分型系统（Allele-Specific Quantitative PCR based genotyping assay, AQP），是一种PCR扩增技术与定量PCR技术结合形成的基因分型系统。该系统采用终点法读取荧光值，能够对SNP、插入或缺失变异位点进行检测，具有很大的灵活性，检测成本低，特别适用于大批量筛选项目，例如植物育种研究和药物基因组研究。

AQP^TM基因分型系统对应的分型试剂由两部分构成：1. SNP位点特异的扩增引物（SNP-Specific Primers）：由两个等位基因特异的正向引物(Allele-specific forward primers)和一个通用反向引物(Common reverse primer)组成；2. HiGeno 2x Probe Mix预混液：包含PCR扩增和产生荧光信号所需的荧光探针。

2. AQP^TM-SNP/InDel分型检测原理

AQP™基因分型试剂使用一种通用的荧光报告系统，该荧光报告系统能够生成仪器可识别的与基因型相匹配的荧光信号。

AQP™基因分型系统包含有两个竞争性的等位基因特异的正向引物和一个通用反向引物（图1A）。两个正向引物3'末端存在单碱基的差异，5'端分别带有不同的接头序列（图1A红色和蓝色部分）。HiGeno 2x Probe Mix中包含有两个不同的荧光探针，两个探针的5'端分别标记有FAM和HEX荧光基团，中间特定碱基带有特异的淬灭基团，3'端序列则分别与正向引物5'端接头序列互补；通过发夹结构，探针的荧光基团与淬灭基团相互靠近，在PCR无扩增情况下，淬灭基团吸收荧光基团的发射光，检测不到荧光信号（图1B）；HiGeno DNA Polymerase是一种高保真的热启动DNA聚合酶(图1C)，在碱基存在错配的情况下不能对DNA模板进行有效扩增。

图1. AQP™基因分型系统组分。

   当PCR扩增反应启动时，等位基因特异引物结合在目标SNP的上游，其3'端碱基位于SNP位点。如果SNP位点是杂合的，则两个引物将结合到相应DNA模板上，而如果SNP位点是纯合的，则仅一个特异引物或另一个特异引物将结合到DNA模板上。同时，通用的反向引物将结合到互补链的SNP位点下游（图2II）。随着PCR扩增反应的进行，等位基因特异的正向引物接头序列会整合到SNP的上游，形成具有接头序列的PCR产物（图2Ⅲ）。在后续PCR扩增中，探针识别接头序列，作为引物进行扩增，形成具有荧光信号的PCR产物（图2V）。如果SNP位点的基因型是纯合的，则仅会生成一种可能的荧光信号，而如果SNP位点是杂合的，则结果将是混合的荧光信号（图2VI）。

图2. AQP^TM基因分型系统原理。Ⅰ, DNA模板；Ⅱ, SNP特异引物扩增；Ⅲ, SNP特异引物扩增产物；Ⅳ, 探针扩增；Ⅴ, 荧光标记产物；Ⅵ, 荧光值读取和SNP分型分析。

3. AQP^TM-SNP/InDel分型试剂盒订购信息